提取質粒DNA的質量和含量的鑒定方法
點擊次數：363 更新時間：2024-10-11
瓊脂糖凝膠電泳是檢測DNA質量的一種常用方法。? 它利用瓊脂糖溶化再凝固后形成的固體基質，在電場作用下，帶負電的DNA分子向陽極遷移，不同大小和構型的DNA分子遷移速度不同，從而分離出不同的區帶。這種方法不僅可用于分離不同分子量的DNA，還能分離相對分子質量相同但構型不同的DNA分子?。
瓊脂糖凝膠電泳的原理基于DNA分子在電場中的遷移特性。DNA分子在高于等電點的溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。遷移速度取決于DNA分子的分子量和構型，分子量越大，遷移速度越慢。瓊脂糖凝膠的濃度也會影響DNA的遷移率，不同濃度的凝膠可以分離不同大小范圍的DNA片段?。
瓊脂糖凝膠電泳鑒定質粒DNA
瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應，DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。
由于糖磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極方向移動。
不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DNA片段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠(ethidum bromide ,EB)，在紫外光下可以檢出 10ng的DNA條帶，在電場中，pH8.0條件下，凝膠中帶負電荷的DNA向陽極遷移。
質粒DNA提取方法
1，堿裂解法
2，煮沸裂解
3，羥基磷灰石柱層析法
4，質粒DNA釋放法
5，酸酚法等。
選擇哪一種方法取決于以下幾個因素
1，質粒的大小
2，大腸桿菌菌株
3，裂解后用于純化的技術和實驗要求
