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    中文名：人血管活性腸肽（VIP）ELISA試劑盒

    別名：人血管活性腸肽（VIP）ELISA Kit

    供貨商：上海遠慕

    產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

    檢測限：1.0 nmol/L

    標記物：HRP

    檢測方法：雙抗體夾心法測抗原、雙抗原夾心法測抗體、間接法測抗體、競爭法測抗體、競爭法測抗原、捕獲包被法測抗體、ABS-ELISA法。

    預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關生物液體中的含量。

    ELISA試劑盒包含以下各組分：

    （1）結合物及標本的稀釋液；

    （2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

    （3）酶標記的抗原或抗體（結合物）；

    （4）酶的底物；

    （5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），ELISA試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）；

    （6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

    標本的采集與保存：

    1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融

    2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

    3.組織勻漿：用預冷的 PBS （0.01mol/L, pH=7.2-7.4）沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織不對應體積的 PBS（一般按 1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記彔。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玱璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。zui后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘，取上清檢測。

    4.細胞培養(yǎng)上清或其他生物標本：

    請 1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

    自備物品

    1、 酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）

    2、 微量加液器及吸頭，EP管

    3、 蒸餾水或去離子水，濾紙

    操作步驟：

    實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫，試劑不能直接在37℃溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

    1、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50?l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40?l，然后再加待測樣品10?l（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

    3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

    5、加酶：每孔加入酶標試劑50?l，空白孔除外。

    6、顯色：每孔先加入顯色劑A50?l，再加入顯色劑B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘。

    7、終止：每孔加終止液50ml，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

    8、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    結果判斷與分析

    1、 儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

    2、 以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的LTB4標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的LTB4含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

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