上海遠慕生物科技有限公司

穩轉細胞株構建方法：
慢病毒載體包裝慢病毒后感染Hela細胞，用嘌呤霉索篩選得到EGFP過表達多克隆細胞株。收到細胞的處理：根據客戶所在地及發貨季節，我們可能采用干冰運輸的凍存細胞或者常溫運輸的培養瓶細胞兩種不同形式發貨。收到細胞后根據細胞運輸類型采用下面兩種方式操作。

穩轉細胞株傳代方式:
1、傳代前將細胞培養液、PBS和yi蛋白酶溫浴到37C。
2、吸去細胞培養液。用PBS漂洗--次。
3、加入適量yi蛋白酶，輕輕晃動細胞瓶，使yi蛋白酶均勻覆蓋細胞。吸去yi蛋白酶，將培養瓶放置在細胞培養箱中，37攝氏度消化。在倒置顯微鏡下觀察，看到細胞分開及稍微變圓即可，過度消化可能導致細胞貼壁困難。
4、加入5ml細胞培養基，用吸管輕柔吹打分散細胞。按1:3到1:5接種細胞。

穩轉細胞株凍存方法;
1、將細胞培養液、PBS和yi蛋白酶和凍存液溫浴到37C。
2、凍存的細胞應為狀態好，生長旺盛的細胞。按細胞傳代方法消化細胞，用適量細胞培養液終止消化，重懸細胞。
3、室溫200g離心10分鐘收集細胞，用凍存液重懸細胞，并調節濃度至大約1X10^6個細胞/ml。分裝到細胞凍存管。
4、將細胞凍存管放入程序降溫盒，-80C過夜。將凍存的細胞轉入液氮中。