大多數(shù)原代貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間是6h到12h，細(xì)胞不貼壁有好多種原因的：
1、如果你用玻璃培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的話，有可能你的瓶子沒處理好；建議你用一次性培養(yǎng)瓶，進(jìn)口的都可以。
2、一般做原代細(xì)胞貼壁培養(yǎng)用yi酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化時(shí)間不到、分散不均勻不貼壁。一般消化有熱消化，就是放在37度里消化，時(shí)間比較短不好控制，傳代培養(yǎng)常用。還有就是冷消化放在4度里，一般在幾個(gè)小時(shí)以上，yi酶濃度也有要求的，一般都用0.125－0.25％之間。ph在7.6左右。
3、還有就是天然培養(yǎng)基的選擇，就是血清種類，血清能夠使細(xì)胞貼壁，并且提供細(xì)胞生長的重要營養(yǎng)成分。
細(xì)胞培養(yǎng)中的不貼壁及分化的解決辦法
如果細(xì)胞呈現(xiàn)不貼壁現(xiàn)象，且細(xì)胞根本就不能錨定的解決辦法:
1、可以在鋪有瓊脂和瓊脂糖的培養(yǎng)皿上克隆細(xì)胞，也可在襯有瓊脂的甲基纖維素的非組織培養(yǎng)用平皿制備細(xì)胞克隆。
2、在這些支持物中應(yīng)適當(dāng)添加生長因子及添加物。3、如使用組織培養(yǎng)用平皿克隆細(xì)胞，應(yīng)在灌制瓊脂等支持物前鋪加飼養(yǎng)層。
如果細(xì)胞呈現(xiàn)不貼壁現(xiàn)象，但細(xì)胞能夠錨定但貼壁不佳的解決辦法:
使用鋪加了甲基纖維素的組織培養(yǎng)用用培養(yǎng)皿進(jìn)行細(xì)胞克隆。
細(xì)胞培養(yǎng)如果細(xì)胞不發(fā)生分化，解決辦法如下：
1、更換能夠誘導(dǎo)細(xì)胞分化的培養(yǎng)條件。
2、在細(xì)胞分離和傳代中使用選擇性培養(yǎng)基。
細(xì)胞培養(yǎng)中如果所養(yǎng)細(xì)胞喪失產(chǎn)物形成能力，解決辦法如下：
1、采用PCR及Northern雜交方法，檢測相關(guān)基因表達(dá)能力。
2、采用PCR及Northern雜交方法檢測報(bào)告基因和方案。
3、使用分化誘導(dǎo)條件。
4、在細(xì)胞分離和傳代過程中針對特定細(xì)胞使用相應(yīng)的選擇培養(yǎng)基。
 |
 |
 |
