細胞株凍存和復蘇實驗詳細說明
點擊次數：978 更新時間：2023-06-19
1. 細胞株取材要求新鮮，無菌，解剖小鼠時，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等，防止污染脾臟。
2. 沖洗脾臟時要盡量洗凈血污，去除無用組織，并要防止組織干燥。
3. 碾磨后及時用清水沖洗篩網，防止組織、細胞阻塞網孔。
4. 計數前，注意吸盡平皿里的細胞，充分混勻，使細胞分散成單個細胞。
5. 實驗操作應在操作臺*無菌區域內進行，勿在邊緣非無菌區域操作。
6. 金屬器械不能在火焰中燒的時間過長，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。
7. 另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養細胞。
8. 吸取過營養液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養液能燒焦形成炭膜，再用時會把有害物帶入營養液中。
9. 不能用手觸及已消毒器皿瓶口、瓶塞內部，吸管前部等所有可能與細胞接觸的部分，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。
10. 開啟、關閉長有細胞的培養瓶時，火焰滅菌時間要短。細胞株防止因溫度過高燒死細胞。
11. 換液時傾倒廢液，瓶口不能接觸廢液缸，速度不能過快，防止廢液四濺。
12. 吹打細胞時，要注意邊角的細胞是否吹打下來。
13. 手或相對較臟的物品不能經過開放的瓶口上，即不可以在開放容器上方操作。
14. 每次操作只處理一株細胞，以免造成細胞交叉污染。
15. 注意自身的安全，對于來自人源性或病毒感染的細胞株應特別小心。操作過程中，應避免引起氣溶膠的產生，小心有毒性試劑例如DMSO，并避免尖銳物品傷人等。
16. 從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存，但為對數生長期細胞。在凍存前一天換一次培養液。
17. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷。
18. 細胞株凍存和復蘇用新配制的培養液。
